精品人妻码一区二区三区-xxxxx性bbbbb欧美-国产精品成人99一区无码-久久99国产综合精品免费

雜交試驗中用于降低背景的封閉劑

發布時間:2025-05-06 點擊:31
試劑用途denhardt試劑northern雜交使用rna探針的雜交單拷貝序列的southern雜交將dna固定于尼龍膜上的雜交denhardt試劑通常配制50×貯存液,過濾后保存于-20℃。可將該貯存液10倍稀釋于預雜交液(常為含有0.5%sds和100μg/ml經變性被打斷的鮭精dna的6×ssc或6×sspe)中。50×denhardt液中含5g聚蔗糖(ficoll,400型,pharmacia)、5g聚乙烯吡咯烷酮和5g牛血清白蛋白(組分v”sigmal),加水至終體積為500ml。blottogrunstein-hogness雜交benton-davis雜交除單拷貝序列southern雜交以外的所有southern雜交斑點印跡1×blott(牛乳轉移技術優化液,bovine lacto transfer technique optimizer),是含5%膠脂奶粉和0.02%疊氮鈉的水溶液,應保存于4℃。使用前可用預雜交液稀釋25倍。blotto不應與高濃度的sds并用,因為后者會導致牛奶中蛋白質析出。如果雜交背景不合要求,可在雜交液中加入np-40至終濃度為1%。blotto不能用作northern雜交的封閉劑,因為這一封閉劑中可能含有rna酶,其活性之高使人無法接受。注意:疊氮鈉有毒性,取用時需戴手套小心操作。含疊氮鈉的溶液應予明確標記。肝素southern雜交原位雜交肝素(sigma h-7005,從豬中提取的二級產品或相當等級的產品)用4×sspe或4×ssc溶解配制成50mg/ml的濃度,保存于4℃。肝素在含有葡聚糖硫酸酯的雜交液中用作封閉劑的濃度為500μg/ml,在不含葡聚糖硫酸酯的雜交液中的濃度為50μg/ml。經變性并被打斷的鮭精dnasouthern和northern雜交把鮭魚精子dna(sigma,ⅲ,鹽鈉)溶解于水配制成10mg/ml的濃度,必要時于室溫磁力攪拌2~4h助溶。把溶液中nacl的濃度調至0.1mol/l,并用酚和酚/氯仿各抽提一次,回收水相。合dna溶液快速通17號皮下注射針頭12次,以剪切dna。加入2倍體積用冰預冷的乙醇沉淀dna。離心回收dna并重溶于水,配制成10mg/ml的濃度,測定溶液的od260值并計算出精確的dna濃度,然后煮沸10min,分裝成小份保存于-20℃。使用前置沸水浴中加熱5min,然后迅速在冰浴中驟冷。預雜交液中應含有100μg/ml經變性并被打斷的鮭魚精子dna

ISO三標認證是什么,三體系認證辦理多少錢?
emas是什么認證,emas是什么意思
煙草行業推行ISO14001標準提高環境管理水平
做一名受歡迎的審核員
守合同重信用企業認定
SMETA、SEDEX和ETI之間的聯系?
申報高新認定時,企業的知識產權貫標算不算研究開發活動?
荊州ISO22000食品安全認證辦理過程是什么?